非洲猪瘟病毒检测试剂 非洲猪瘟检测试剂厂家
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产品价格:¥850(人民币)
  • 规格:48T
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    商品详情

      非洲猪瘟病毒荧光 PCR 核酸检测试剂盒(快提+预分装)

      使用说明书 兽用 【操作步骤】

      一、样品制备

      1、血液样品:采集抗凝血(抗凝剂为 EDTA)或血清样品,编号备用。

      2、组织样品:采集、肝、淋巴结、扁桃体等病变组织样品或软蜱 0.1g(黄豆粒大小),眼科剪剪

      碎于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨,再加 1mL 生理盐水混匀,4℃条件下 8000 rpm/分钟离心 2 分

      钟,取上清液于灭菌离心管中,编号备用。

      二、DNA 提取

      取反应液 A 20μL 分别加入到新的 1.5mL 离心管,加入抗凝血或血清或组织上清液 2 μL,混匀,室

      温(20℃左右)静置 3 分钟,加入反应液 B 20 μL,吹打混匀即可,若为抗凝全血,则需 8000rpm/分钟再

      离心 2 分钟后做为待检 DNA 溶液。

      三、PCR 扩增

      1、试剂准备:根据当次实验所需要的反应数(反应数=待检样本数+阴性对照+阳性对照),取等量的

      八联 PCR 反应管,在室温融化后,瞬离,并做好相应标记(操作过程要避光),剩余试剂放回-20℃冷冻

      保存;

      2、加样扩增:分别向 PCR 管中加入 5 μL 待检样本 DNA 或阴性对照或阳性对照,混匀并瞬离,放入

      荧光 PCR 仪上运行以下程序:

      荧光通道选择 FAM,在 40 循环阶段每个循环的 55℃时收集荧光信号。设置扩增体系为 25 μL,同时

      要选择 passive reference 和 quencher 为 none 的模式。

      (注:若荧光 PCR 仪(如 ABI7500)按说明书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行,可将预扩增和 PCR

      扩增条件变更为 95℃:5 秒 55℃:30 秒。)

      【结果判定】

      1、基线和阈值设定:参照仪器自动产生或设定的阈值,手动阈值参照阴性对照上线设定。

      2、质量控制:反应结束后,阴性对照的检测结果应无特定的扩增曲线,Ct 值为>38 或无;阳性对照

      的 Ct 值应≤30.0,且明显的扩增曲线;否则实验视为无效。

      3、样品判定:待检样品荧光信号有指数型增加,且结果显示 Ct 值<35.0,报告为阳性;未检测到 Ct

      值或 Ct 值>38 或无明显扩增曲线,则样品判定为阴性。35≤Ct 值≤38 时,复检一次,重复结果为阳性者判

      定为阳性,否则判定为阴性。

      【注意事项】

      1、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书,严格按照操作步骤执行,在操作过程中对时间、试剂体积等控制可以获得的结果。

      2、实验室应严格按照有关规定分区管理。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。

      3、有关耗材确保洁净、无菌,酸提取完成后尽快进入下一步试验或冷冻保存。

      4、对于荧光 PCR 管要避免徒手或使用过的手套接触,检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

      5、冻存试剂使用前应于室温下完全融化,瞬时离心使液体完全沉于管底,操作时应注意避光,避免强

      光暴露和长时间光照。

      6、样品、阴性对照封盖后,在通风环境添加阳性对照并及时封盖,避免组分间及气溶胶等假阳性污染。

      7、扩增反应完毕后的 PCR 管严禁开盖,应和产生的其它试验废弃物一起及时收集,远离 PCR 实验室

      进行无害化处理。

      【规格】48 头份/盒。

      【贮藏与有效期】-20℃以下避光保存,有效期 12 个月。

      仅供兽医诊断使用

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